Skip to content

Centralne przedwczesne dojrzewanie płciowe wywołane mutacjami w nadruku Gene MKRN3 AD 3

1 miesiąc ago

417 words

Rodziny przodków z wadami MKRN3 zostały ustalone za pomocą ustnego raportu dla badaczy klinicznych (Tabela 1). Protokół został zatwierdzony przez komisję etyczną Uniwersytetu w Sao Paulo. Pisemną świadomą zgodę uzyskano od wszystkich uczestników. Dwóch ostatnich autorów ręczy za dokładność i kompletność danych oraz wierność badania w protokole. Testy hormonalne
Stężenia hormonu luteinizującego, FSH, testosteronu i estradiolu określono za pomocą testów immunochemiluminometrycznych.22 Współczynnik zmienności między testami wynosił 5% lub mniej dla wszystkich testów.
Podczas testu stymulacji GnRH poziom hormonu luteinizującego i FSH w osoczu mierzono 15 minut przed dożylnym podaniem 100 .g GnRH, w momencie podawania, oraz 15, 30, 45 i 60 minut po podaniu. U obu płci podstawowe poziomy luteinizującego hormonu wyższe niż 0,15 U na litr były uważane za poziomy w fazie dojrzewania, a szczytowe poziomy hormonu luteinizującego stymulowane GnRH wyższe niż 5,0 U na litr były uważane za odpowiedzi w okresie dojrzewania.22 Podstawowy poziom estradiolu wyższy niż 15 pg na mililitr i poziomy podstawowego testosteronu wyższe niż 12 ng na decylitr były uważane za poziomy w fazie dojrzewania.
Analiza genetyczna
Genomowy DNA ekstrahowano z leukocytów krwi obwodowej. Przeprowadzono sekwencjonowanie całego egzaminu dla wybranych pacjentów (w Broad Institute), jak opisano wcześniej23 (szczegóły w Dodatku Uzupełniającym). Potwierdziliśmy identyfikację wariantów w regionie kodującym MKRN3 za pomocą amplifikacji łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR), a następnie sekwencjonowania produktów przy użyciu konwencjonalnej metody Sangera. W celu porównania częstości występowania skracających się wariantów w rodzinach i wariantu serwera exome (obsługiwanego przez National Heart, Lung i Blood Institute), użyliśmy dokładnego testu Fishera do porównania liczby nosicieli mutacji ramek lub bezsensownych, licząc każdego członka rodziny. w wariancie exome serwera i licząc oboje rodziców w każdej rodzinie, aby uwzględnić mutacje w poszukiwaniu wielu potomków. Do analizy unikalnych wariantów włączono tylko jedną osobę (lub jedną parę rodziców) na jeden wariant w analizie.
Testy na myszach
RNA wyekstrahowano z łukowatego jądra podwzgórza trzech samców i trzech samic myszy w dniach 10, 12, 15, 18, 22, 26, 30 i 45 po urodzeniu. Rozwój płciowy nastąpił pomiędzy 15 i 30 dniem myszy wskazuje na to wzrost ekspresji podwzgórzowego RNA informacyjnego RNA (mRNA) Tac2 (lub neurokininy B) .24 RNA poddano odwrotnej transkrypcji, a następnie przeprowadzono ilościową analizę PCR w czasie rzeczywistym w celu pomiaru poziomów mRNA Mkrn3, znormalizowanych do białka rybosomalnego L19 ( patrz Dodatek Uzupełniający).
Wyniki
Analiza sekwencji
Rysunek 2
[podobne: olej arganowy, olej arganowy na włosy, oleje do włosów ]

Powiązane tematy z artykułem: olej arganowy olej arganowy na włosy oleje do włosów